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重组人生长激素的原核分泌表达及其活性分析

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【作者】 刘玉林许国杰刘涵刘云南朱秋媚曲丹华雷宇晶王江林刘琳琳张红吕效宇刘景会

【Author】 LIU Yu-lin;XU Guo-jie;LIU Han;LIU Yun-nan;ZHU Qiu-mei;QU Dan-hua;LEI Yu-jing;WANG Jiang-lin;LIU Lin-lin;ZHANG Hong;LV Xiao-yu;LIU Jing-hui;Changchun Institute of Biological Products Co., Ltd.;

【机构】 长春生物制品研究所有限责任公司细胞因子室长春百益制药有限责任公司质量管理部吉林大学第二医院呼吸与危重症医学科

【摘要】 目的构建重组人生长激素(recombinant human growth hormone,rhGH)分泌表达质粒,进行原核表达,并分析其活性。方法人工合成包含phoA启动子、STⅡ信号肽序列及hGH基因优化序列的目的基因,与pBR322载体连接,构建重组克隆质粒pBR322-hGH;再将目的基因亚克隆至pACYC184载体,构建重组表达质粒pAC-hGH,进行酶切鉴定及测序分析。将鉴定正确的重组表达质粒pAC-hGH转化至感受态大肠埃希菌W3110中,构建重组工程菌,经诱导表达后进行DEAE-Sepharose FF纯化,纯化产物经SDS-PAGE、分子排阻色谱、N-末端氨基酸序列及活性分析。结果重组表达质粒经酶切及测序鉴定,构建正确。表达产物经SDS-PAGE分析可见相对分子质量约22 000的目的条带,菌体相对表达量达30%以上;纯化产物电泳纯度达95%以上,分子排阻色谱保留时间及N-末端15个氨基酸均与国家标准品一致,比活性大于3.0 IU/mg。结论成功构建了分泌表达rhGH的重组质粒,且获得了纯度及活性均较高的rhGH,为其产品的开发奠定了基础。

【所属期刊栏目】 治疗性制剂 (2017年12期)
  • 【DOI】10.13200/j.cnki.cjb.002024
  • 【分类号】Q78;R58
  • 【下载频次】202
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