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促黄体激素释放激素-TAT-p53融合蛋白制备及其对肿瘤细胞增殖作用的影响

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【作者】 马洪圆田园李泽鸿张国利吴广谋余晓颖陈云雨岳玉环

【Author】 MA Hong-yuan;TIAN Yuan;LI Ze-hong;ZHANG Guo-li;WU Guang-mou;YU Xiao-ying;CHEN Yun-yu;YUE Yu-huan;Institute of Military Veterinary,Institute of Military Medical Sciences,Academy of Military Sciences;

【通讯作者】 岳玉环;

【机构】 军事科学院军事医学研究院军事兽医研究所吉林农业大学生命科学学院皖南医学院药学院新药筛选与评价中心

【摘要】 目的制备促黄体激素释放激素(luteinizing hormone releasing hormone,LHRH)-TAT-p53融合蛋白,探讨其抗肿瘤作用。方法以重组质粒pET28a-p53为模板,经PCR扩增目的基因,双酶切,克隆至原核表达载体p ET20b中,构建重组表达质粒p ET20b-LHRH-TAT-p53,并在E. coli中IPTG诱导表达,经金属螯合层析、DEAE弱阴离子交换层析纯化目的蛋白。取对数生长期的HeLa、BGC及MDCK细胞进行细胞活性试验,检测pET28a-p53蛋白活性。结果经双酶切及测序鉴定,重组质粒pET20b-LHRH-TAT-p53构建正确;融合蛋白相对分子质量约54 000,主要以包涵体形式存在,表达量约占菌体总蛋白55%;HeLa及BGC细胞加入纯化复性的重组蛋白后,细胞变圆、色暗、折光性变差,甚至裂解死亡,细胞死亡数增加,而MDCK细胞无变化;一定浓度范围内(25~120μg/m L)蛋白对HeLa及BGC细胞有明显的抑制作用。结论成功制备了LHRH-TAT-p53融合蛋白,该蛋白具有生物活性,对肿瘤细胞有杀伤作用。本研究为下一步制备靶向LHRH的肿瘤治疗药物提供了参考。

【基金】 国家重点研发计划项目(2016YFD0501002);国家自然科学基金青年科学基金项目(81703546);安徽省自然科学基金青年科学基金项目(1808085QH265)
【所属期刊栏目】 基础研究 (2019年08期)
  • 【DOI】10.13200/j.cnki.cjb.002716
  • 【分类号】R96
  • 【被引频次】1
  • 【下载频次】42
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