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IQ结构域的GTP酶激活蛋白1基因短发卡RNA重组质粒的构建及表达

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【作者】 邓青杨成园王安彦牛仕诗郝跃鹏寇俊婷孙雪娇王晓霞

【Author】 DENG Qing;YANG Cheng-yuan;WANG An-yan;NIU Shi-shi;HAO Yue-peng;KOU Jun-ting;SUN Xue-jiao;WANG Xiao-xia;Department of Biochemistry and Molecular Biology,Shanxi Medical University;

【通讯作者】 王晓霞;

【机构】 山西医科大学生物化学与分子生物学教研室

【摘要】 目的构建特异性针对人IQ结构域的GTP酶激活蛋白1(IQ-domain GTPase-activating protein 1,IQGAP1)基因短发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)的重组质粒,检测其在人食管癌KYSE150细胞中的表达。方法以人IQGAP1 mRNA序列为靶向设计合成含有shRNA序列的寡核苷酸,克隆至真核表达载体GV102中,构建重组质粒IQGAP1-shRNA,转化DH5α感受态细胞,挑取阳性克隆测序鉴定。用脂质体2000介导IQGAP1-shRNA转染KYSE150细胞作为IQGAP1-shRNA干扰组,同时设转染载体GV102为对照组,RT-PCR及Western blot法检测IQGAP1基因的干扰效果。结果经测序鉴定,重组质粒IQGAP1-shRNA构建正确。IQGAP1-shRNA干扰组及对照组转染KYSE150细胞均可见绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP),两组转染效率分别为(76±5. 780)%和(83±3. 851)%。IQGAP1-shRNA干扰组IQGAP1 mRNA转录水平和蛋白表达水平与对照组比较差异均有统计学意义(P <0. 001),表达抑制率分别为(82±2. 424)%及(77±2. 791)%。结论成功构建了IQGAP1-shRNA真核表达质粒,能特异性降低食管癌KYSE150细胞中IQGAP1基因的表达,为进一步研究IQGAP1基因在食管癌中的功能及靶向治疗作用奠定了基础。

【基金】 国家自然科学基金(81372676);山西省自然科学基金(201601D011130)
【所属期刊栏目】 基础研究 (2019年08期)
  • 【DOI】10.13200/j.cnki.cjb.002718
  • 【分类号】R735.1
  • 【下载频次】80
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