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GⅡ.21型诺如病毒衣壳蛋白VP1的表达、纯化及鉴定

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【作者】 李攀刘术敏邓丹妹吴常伟程英杰黄恩启

【Author】 LI Pan;LIU Shu-min;DENG Dan-mei;WU Chang-wei;CHENG Ying-jie;HUANG En-qi;Anhui Zhifei Longcom Biopharmaceutical Co.,Ltd.;

【通讯作者】 黄恩启;

【机构】 安徽智飞龙科马生物制药有限公司

【摘要】 目的构建含有GⅡ.21型人诺如病毒(human norovirus,HuNoV)衣壳蛋白VP1基因的重组质粒,通过PichiaPink毕赤酵母表达VP1蛋白,并鉴定纯化产物。方法合成NoV GⅡ.21 VP1蛋白基因序列,将其连接至pPink-HC载体,构建重组质粒pPink-HC-GⅡ.21-VP1;经测序鉴定后,电转化毕赤酵母PichiaPink,甲醇诱导目的蛋白表达;采用AKTA pure M150型纯化仪纯化目的蛋白,Western blot法分析其抗原性,SEC-HPLC法检测纯化蛋白出峰时间。结果经测序鉴定,重组质粒pPink-HC-GⅡ.21-VP1构建正确;纯化的目的蛋白VP1纯度在95%以上,能与抗NoV病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)抗体发生反应;测定目的蛋白出峰时间为16. 923 min,与NoV VLP理论出峰时间一致。结论成功在毕赤酵母高表达了GⅡ.21衣壳蛋白VP1,并制备了高纯度及良好抗原性的目的蛋白,为多价重组NoV疫苗的研发及规模化生产奠定了基础。

【关键词】 GⅡ.21诺如病毒VP1蛋白毕赤酵母
【所属期刊栏目】 基础研究 (2019年10期)
  • 【DOI】10.13200/j.cnki.cjb.002830
  • 【分类号】R373
  • 【下载频次】71
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