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人呼吸道合胞病毒核蛋白、磷蛋白和M2-1蛋白的表达及鉴定

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【作者】 韦钦钦朱传凤马超傅生芳高雪军

【Author】 WEI Qin-qin;ZHU Chuan-feng;MA Chao;FU Sheng-fang;GAO Xue-jun;The Second Department of Research,Lanzhou Institute of Biological Products Co.,Ltd.,Center for Gansu Provincial Vaccine Engineering Research;

【通讯作者】 朱传凤;高雪军;

【机构】 兰州生物制品研究所有限责任公司第二研究室甘肃省疫苗工程技术研究中心

【摘要】 目的构建含有人呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytial virus,hRSV)核蛋白(nucleoprotein,N)、磷蛋白(phosphoprotein,P)和转录延长/终止抑制因子(transcription elongation/antitermination factor M2-1,M2-1)蛋白编码基因的表达载体,并转染BSR T7/5细胞,鉴定蛋白的表达。方法根据hRSV兰州株(LZ01/09)的N、P和M2-1基因序列设计3对特异性引物,以pcDNA-N、pcDNA-P和pcDNA-M2-1质粒为模板,PCR扩增N、P和M2-1基因片段,与pGEM-T载体连接,构建亚克隆载体;再通过体外酶切连接将内部核糖体进入位点(internal ribosome entry site,IRES)序列克隆至p RSV7载体T7启动子表达盒基因的上游,构建基本表达载体p7IK;通过酶切连接构建表达载体p7IK-N、p7IK-P和p7IK-M2-1,转染BSR T7/5细胞,采用Western blot法鉴定蛋白的表达。结果亚克隆载体、基本表达载体和表达载体经酶切及测序验证均构建正确;Western blot可检测到N、P和M2-1蛋白的特异性条带。结论成功构建了含有N、P和M2-1编码基因的表达载体,经BSR T7/5细胞鉴定3种蛋白成功表达,为进一步应用反向遗传学技术拯救RSV及研发RSV减毒活疫苗奠定了基础。

【所属期刊栏目】 基础研究 (2019年11期)
  • 【DOI】10.13200/j.cnki.cjb.002856
  • 【分类号】R392
  • 【下载频次】52
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