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不同硫代修饰CpG ODN佐剂活性的比较

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【作者】 屈旭成何鹏邱少辉方鑫童海青葛君李建强姜崴胡忠玉

【Author】 QU Xu-cheng;HE Peng;QIU Shao-hui;FANG Xin;TONG Hai-qing;GE Jun;LI Jian-qiang;JIANG Wei;HU Zhong-yu;National Institutes for Food and Drug Control,Key Laboratory of the Ministry of Health for Research on Quality and Standardization of Biotech Products;

【通讯作者】 姜崴;胡忠玉;

【机构】 中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室长春生物制品研究所有限责任公司安徽龙科马生物制药有限责任公司南京远大赛威信生物医药有限公司

【摘要】 目的评价相同序列不同硫代修饰CpG ODN佐剂联合重组乙型肝炎疫苗表面抗原(rHBsAg)在BALB/c小鼠中的免疫原性,及在HEK-BlueTM hTLR9细胞上的活性。方法将4种(全硫代修饰的QCX1、部分硫代修饰的HS1和HS2及非硫代修饰的NS)CpG ODN及其阳性对照(全硫代修饰的CpG7909)按照相同配比分别与rHBsAg混合,使CpG ODN和rHBsAg终浓度均为20μg/mL,同时设等剂量抗原对照组(rHBsAg)及空白对照组(生理盐水)。分别肌肉免疫BALB/c小鼠,每只100μL,于免疫后1、2、4周摘眼球采血后处死小鼠,分离血清,应用化学发光微粒子免疫分析技术检测乙型肝炎病毒表面抗体(antibody to hepatitis B virus surface antigen,Anti-HBs)水平;取小鼠脾脏,制备脾细胞悬液,分离脾单个核细胞(mononuclear cell,MNCs),应用ELISPOT技术检测抗原特异性IFNγ、IL-2的分泌水平。体外应用HEK-BlueTM hTLR9细胞,检测4种CpG ODN及阳性对照CpG7909在该细胞上的活性,以及血清中放置不同时间后在该细胞上的活性。结果免疫后1、2、4周,各组小鼠血清Anti-HBs水平逐渐升高,其中免后2、4周,QCX1组小鼠血清抗体水平高于抗原对照、HS1、HS2、NS组;QCX1组小鼠MNCs在rHBsAg刺激下,分泌IFNγ和IL-2的能力显著高于HS1、HS2、NS和抗原对照组(P均<0. 01);QCX1和HS2组刺激HEK-BlueTM hTLR9细胞活性的半数有效浓度(EC50)分别为5. 94和6. 52μg/m L,明显低于HS1(46. 54μg/m L)和NS组(49. 10μg/m L);随着不同硫代修饰CpG ODN在血清中放置时间的延长,仅全硫代修饰QCX1和CpG7909组细胞培养物A655基本不变,其他组均出现不同程度降低。结论全硫代修饰组QCX1佐剂增强小鼠细胞和体液免疫的能力与CpG7909相当,且在HEK-BlueTM hTLR9细胞上呈现较好的活性,在血清中也具有较好的稳定性。

【关键词】 CpG ODN佐剂硫代修饰乙型肝炎疫苗活性
【基金】 国家“十三五”新药创制科技重大专项“创新生物技术药评价及标准化关键技术研究”(2018zx09101001)
【所属期刊栏目】 基础研究 (2020年01期)
  • 【DOI】10.13200/j.cnki.cjb.002957
  • 【分类号】R392
  • 【下载频次】17
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