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甲型肝炎病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立及在贝类检测中的应用

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【作者】 袁亚迪孙世洋卞莲莲崔博沛高帆刘佩刘令九毛群颖梁争论

【Author】 YUAN Ya-di;SUN Shi-yang;BIAN Lian-lian;CUI Bo-pei;GAO Fan;LIU Pei;LIU Ling-jiu;MAO Qun-ying;LIANG Zheng-lun;Division of Hepatitis Vaccine,National Institutes for Food and Drug Control;

【通讯作者】 毛群颖;

【机构】 中国食品药品检定研究院肝炎病毒疫苗室长春生物制品研究所有限责任公司

【摘要】 目的建立甲型肝炎病毒(hepatitis A,HAV)荧光定量逆转录PCR(q RT-PCR)检测方法,用于贝类中HAV的检测。方法选择HAV高度保守的5’UTR区设计引物及探针,以HAV质粒为标准品,HAV活病毒为样本,建立HAV qRT-PCR检测方法;验证该方法的特异性、灵敏度、重复性、准确性及中间精密度;采用建立的方法检测HAV活病毒和贝类样本,并与我国贝类HAV检测国标方法(GB/T22287-2008法)进行比较。结果通过14对引物探针分别对HAV质粒(101~108拷贝/μL)检测结果的比较,选择灵敏度最优的Pan1引物,建立了HAV qRT-PCR检测方法(PAN法)。PAN法对CVA16、CVB3、EVA71、PV等11种RNA病毒均无阳性扩增;灵敏度达10 TCID50/m L;检测2. 699~5. 699 LgTCID50/mL各浓度HAV活病毒的回收率为82. 9%~127. 0%,单人和双人检测的变异系数分别为3. 0%~7. 0%和2. 6%~8. 4%。PAN法检测HAV活病毒的灵敏度(10 TCID50/m L)优于GB/T22287-2008法;两种方法对20份贝类样本的检测结果均为阴性,符合率为100%。结论建立的PAN法具有良好的特异性、灵敏度、准确性、重复性和中间精密度,可用于贝类样本中HAV的核酸定量快速检测。

【关键词】 甲型肝炎病毒荧光定量RT-PCR贝类
【基金】 贝类中致病微生物富集过程及控制技术(2017YFC1600703)
【所属期刊栏目】 技术方法 (2020年01期)
  • 【DOI】10.13200/j.cnki.cjb.002963
  • 【分类号】R440
  • 【下载频次】33
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