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α-肿瘤坏死因子吖啶酯化学发光免疫分析方法的建立及验证

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【作者】 欧赛英徐海伟陈秀发沙利烽梁辰冯杰薛辉颜光涛

【Author】 OU Sai-ying;XU Hai-wei;CHEN Xiu-fa;SHA Li-feng;LIANG Chen;FENG Jie;XUE Hui;YAN Guang-tao;Suzhou Hybiome Biomedical Engineering Co.,LTD.;

【通讯作者】 颜光涛;

【机构】 苏州长光华医生物医学工程有限公司中国人民解放军总医院医学检验中心

【摘要】 目的建立检测ɑ-肿瘤坏死因子(tumor necrosis factorɑ,TNF-ɑ)的吖啶酯化学发光免疫分析(chemiluminescence immunoassay,CLIA)方法并进行验证。方法采用全自动化学发光分析仪,用吖啶酯标记TNF-ɑ多克隆抗体,生物素标记TNF-ɑ单克隆抗体,链霉亲和素包被磁颗粒,利用磁颗粒-链霉亲和素-生物素系统实现固相和液相的分离,建立检测TNF-ɑ的吖啶酯CLIA方法;验证方法的检测限、线性范围、准确性、精密度及特异性,用优化后的方法检测150份健康血清样本确定正常参考值范围。应用该方法与西门子immulite1000试剂盒平行测定75份TNF-ɑ血清样本。结果吖啶酯CLIA方法反应条件为加入50μL样本,用PBS-1%BSA稀释校准品,加入1∶2 000稀释生物素及吖啶酯标记抗体。该方法最低检测限为0. 245~0. 519 pg/mL,样本在5~1 000 pg/mL范围r均大于0. 990 0;TNF-ɑ质控品回收率为92. 6%~104. 9%,3种浓度质控品批内CV <5%,总CV <10%;对溶血、脂血、类风湿因子及常见肿瘤药等干扰率均小于10%;系统检测值可溯源至国际标准品。150份健康血清样本正常参考值范围确定为<10 pg/mL。该方法与西门子TNF-ɑ蛋白检测试剂盒相关系数r=0. 989 0;检测值之间差异呈现随机化,无系统误差。结论成功建立了优化检测TNF-ɑ的吖啶酯CLIA方法,该方法精密度高、线性范围广、特异性强、检测结果准确性好,适合临床推广使用。

【基金】 国家科技支撑计划(2015BAK45B01)
【所属期刊栏目】 技术方法 (2020年03期)
  • 【DOI】10.13200/j.cnki.cjb.003011
  • 【分类号】R392-33
  • 【下载频次】80
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