节点文献

重组人肠道病毒71型病毒样颗粒疫苗外源DNA残留量检测方法的建立

免费订阅

【作者】 杨萍张艳李微刘大维闫慧褚彦飞白鹭谷铁军孙博

【Author】 YANG Ping;ZHANG Yan;LI Wei;LIU Da-wei;YAN Hui;CHU Yan-fei;BAI Lu;GU Tie-jie;SUN Bo;National Engineering Laboratory for AIDS Vaccine,Jilin University;

【通讯作者】 孙博;

【机构】 吉林大学艾滋病疫苗国家工程实验室吉林大学生命科学学院长春百克生物科技股份公司

【摘要】 目的建立重组人肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)疫苗原液中昆虫细胞宿主DNA残留的地高辛探针杂交检测方法。方法抽提昆虫细胞sf9基因组DNA,经分子筛纯化后作为阳性对照品;分别以1 000~5 000 bp和100~1 000 bp的基因组DNA超声随机小片段为模板,制备地高辛探针,与阳性对照进行杂交试验。同时验证方法的检测范围、灵敏度和特异性,并采用该方法对3批重组EV71 VLPs疫苗原液中宿主DNA残留量进行测定。结果纯化后DNA样品浓度为47. 5 ng/μL,A260/A280值为1. 86,可作为阳性对照。以100~1 000 bp DNA超声随机小片段作为模板,探针标记效率更高,杂交显色更清晰。该法检测范围为10 pg~10 ng,灵敏度达1 pg,特异性强。3批重组EV71 VLPs疫苗原液中每人份剂量的宿主细胞DNA残留均<50 pg。结论本实验建立的方法特异性强,灵敏度高,可用于重组EV71 VLPs疫苗制备过程中的原液检定及质量控制。

【基金】 吉林省科技发展计划(20160209016YY)
【所属期刊栏目】 技术方法 (2020年03期)
  • 【DOI】10.13200/j.cnki.cjb.003012
  • 【分类号】R927.2
  • 【下载频次】60
节点文献中: 

本文链接的文献网络图示:

浏览历史:
下载历史: