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19F型肺炎链球菌菌种的复壮及其荚膜多糖纯化工艺的优化

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【作者】 陈元芬陈道远吴强范杨艳陶杨张堃王学马礼耕文彬刘思麟

【Author】 CHEN Yuan-fen;CHEN Dao-yuan;WU Qiang;FAN Yang-yan;TAO Yang;ZHANG Kun;WANG Xue;MA Li-geng;WEN Bin;LIU Si-lin;Chengdu Olymvax Biopharmaceuticals Inc.;

【通讯作者】 陈元芬;

【机构】 成都欧林生物科技股份有限公司

【摘要】 目的开发复壮肺炎链球菌19F型(Sreptococcus pneumoniae serotype 19F,简称PN19F)菌种的方法,并优化其荚膜多糖的纯化工艺。方法配制PN19F菌种用液体扩增培养基和固体选择培养基,筛选出荚膜较厚的单菌落,比较复壮前后PN19F菌种的发酵培养情况、纯化后多糖收获量及多糖质量;将发酵液裂解后分别酸沉淀8、24和48 h,并经100 KD超滤纯化,再分别用乙醇法和冻干法制备精制多糖,比较其多糖收获量、组分检定结果、抗原活性、核磁共振图谱。结果两种培养基复壮前后的PN19F菌种,发酵收获菌液A600值及培养时间变化不大。纯化后多糖收获量分别为0. 2和0. 6 g/L,即复壮后多糖收率提高了195%。酸沉淀8、24 h后纯化的多糖质量合格,且24 h较8 h多糖收率高约38%,酸沉淀时间达48 h时,产率无明显变化,但多糖质量不合格。乙醇法和冻干法制备的精制多糖各项指标均合格,且无明显差异。结论应用制备的两种培养基复壮的PN19F菌种,可明显提高荚膜多糖产量。PN19F菌种的酸沉淀时间不超过24 h,乙醇法和冻干法均可用于精制多糖制备。

【关键词】 肺炎链球菌复壮荚膜多糖纯化
【所属期刊栏目】 技术方法 (2020年03期)
  • 【DOI】10.13200/j.cnki.cjb.003014
  • 【分类号】R392
  • 【下载频次】51
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