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猪流行性腹泻病毒流行株S蛋白高变区B细胞线性表位肽的鉴定

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【作者】 刘英杰李凤平董世娟王瑞阳于瑞嵩王燕李震

【Author】 LIU Ying-Jie;LI Feng-Ping;DONG Shi-Juan;WANG Rui-Yang;YU Rui-Song;WANG Yan;LI Zhen;School of Bioengineering, Qilu University of Technology (Shandong Academy of Sciences);Shanghai Engineering Research Center of Breeding Pig, Institute of Animal Husbandry & Veterinary Science,Shanghai Academy of Agricultural Sciences;College of Fisheries and Life Science, Shanghai Ocean University;Shanghai Key Laboratory of Agricultural Genetics and Breeding;

【通讯作者】 于瑞嵩;王燕;

【机构】 齐鲁工业大学生物工程学院(山东省科学院)上海种猪工程技术研究中心上海市农业科学院畜牧兽医研究所上海海洋大学水产与生命学院上海市农业遗传育种重点实验室

【摘要】 【背景】对猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)经典毒株与流行毒株S蛋白氨基酸序列比对显示,变异位点主要集中在S蛋白的N端。【目的】鉴定PEDV流行毒株S蛋白高变区(S10A,1-496 aa)的B细胞线性表位肽,特别是流行毒株特异性B细胞表位肽。【方法】以SDS-PAGE割胶纯化大肠杆菌表达的PEDV流行株SD2014 S蛋白高变区片段(S10ASD2014),免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体;在E. coli中谷胱甘肽巯基转移酶(Glutathione S-transferase,GST)融合表达覆盖S10ASD2014序列全长且彼此重叠8个氨基酸残基的系列16肽。以制备的抗S10ASD2014多抗为一抗,通过Western blot筛选系列16肽中的阳性反应性16肽,鉴定S10ASD2014上的B细胞线性表位肽;利用抗PEDV经典毒株(CV777)S蛋白高变区片段(S10ACV777)多抗血清鉴定S10ASD2014上的保守性B细胞线性表位肽。【结果】重组表达的S10ASD2014相对分子质量约为72 kD;纯化的S10ASD2014表位肽能被PEDV阳性血清识别。制备的抗S10ASD2014多抗可以识别PEDV DR13弱毒株。利用抗S10ASD2014血清和抗S10ACV777血清从61个GST融合表达的16肽中鉴定到28个阳性反应16肽,其中13个为2种血清共同识别16肽。对24株PEDV不同亚群代表毒株的对应区域进行同源性分析表明2个阳性16肽为保守性表位肽。【结论】确定了PEDV流行株SD2014 S蛋白高变区的B细胞线性表位肽,B细胞线性表位肽,特别是流行毒株特异性表位肽的确定有助于了解S蛋白的结构与功能,为建立以表位为基础的PEDV感染检测方法打下良好基础。

【基金】 国家重点研发计划项目(2016YFD0500101);国家自然科学基金(31402219,31572519);上海市科技兴农重点攻关项目(沪农科攻字(2015)第6-1-9号)~~
【所属期刊栏目】 动物病毒学专栏 (2019年07期)
  • 【DOI】10.13344/j.microbiol.china.190110
  • 【分类号】S852.651
  • 【下载频次】56
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