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猪流行性腹泻病毒S2截短肽的原核表达及其线性B细胞表位区鉴定

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【作者】 李凤平刘英杰董世娟王瑞阳王剑于瑞嵩李震

【Author】 LI Feng-Ping;LIU Ying-Jie;DONG Shi-Juan;WANG Rui-Yang;WANG Jian;YU Rui-Song;LI Zhen;College of Fisheries and Life Science, Shanghai Ocean University;Shanghai Engineering Research Center of Breeding Pig, Institute of Animal Husbandry & Veterinary Science, Shanghai Academy of Agricultural Sciences;School of Biological Engineering, Qilu University of Technology (Shandong Academy of Sciences);Shanghai Key Laboratory of Agricultural Genetics and Breeding;

【通讯作者】 于瑞嵩;李震;

【机构】 上海海洋大学水产与生命学院上海种猪工程技术研究中心上海市农业科学院畜牧兽医研究所齐鲁工业大学生物工程学院(山东省科学院)上海农业遗传育种重点实验室

【摘要】 【背景】由猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)引起的猪流行性腹泻给养猪业造成了巨大的经济损失。PEDV S蛋白可以诱导宿主产生中和抗体。【目的】原核表达PEDV CV777疫苗株S2截短肽(aa:961-1 382)并制备其多克隆抗体;鉴定表达的S2截短肽上的线性B细胞表位区。【方法】将经密码子优化的PEDV S2截短肽编码DNA (s2t)克隆至载体p ET-28a中并转化Escherichia coli BL21(DE3),利用IPTG诱导S2截短肽表达。以经SDS-PAGE切胶纯化的重组S2截短肽免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。在E. coli BL21中GST融合表达覆盖S2截短肽序列全长、彼此重叠8个氨基酸残基的系列16肽。以制备的抗S2截短肽兔血清为一抗,通过Westernblot(WB)筛选系列16肽中的阳性反应性16肽,鉴定S2截短肽上的线性B细胞表位区。【结果】重组PEDV S2截短肽的相对分子质量约为50 kD;诱导4 h表达量最高,且主要形成包涵体。WB结果显示,纯化的S2截短肽能被猪抗PEDV血清识别;以纯化的S2截短肽免疫新西兰大白兔制备多抗血清,ELISA法检测抗体效价位于1:25 600-1:102 400之间。免疫组化和间接免疫荧光分析均表明,制备的多抗血清可以识别Vero细胞培养的PEDV DR13弱毒株。以制备的多抗血清通过WB从52个GST融合表达的16肽中鉴定到11个阳性反应性16肽。WB分析显示,得到的阳性反应性16肽都可以被猪抗PEDV血清识别。鉴定到的阳性16肽在S2截短肽上形成4个线性B细胞表位区(aa:969-984;1 065-1 096;1 225-1 280;1 361-1 382)。【结论】高效价抗PEDV S2截短肽多克隆抗体的制备和S2截短肽上线性B细胞抗原表位区的确定有助于了解S蛋白的结构与功能,为建立有效的PEDV检测方法奠定了基础。

【基金】 国家重点研发计划(2016YFD0500101);国家自然科学基金(31402219,315725199);上海市科技兴农重点攻关项目(沪农科攻字(2015)第6-1-9号)~~
【所属期刊栏目】 动物病毒学专栏 (2019年07期)
  • 【DOI】10.13344/j.microbiol.china.190005
  • 【分类号】S852.651
  • 【下载频次】116
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