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基于脂蛋白P80的滑液支原体抗体ELISA检测方法的建立及应用

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【作者】 王宇李浩然温政尚原冰刘婷丁铲高崧祁晶晶于圣青

【Author】 Yu Wang;Haoran Li;Zheng Wen;Yuanbing Shang;Ting Liu;Chan Ding;Song Gao;Jingjing Qi;Shengqing Yu;Shanghai Veterinary Research Institute, the Chinese Academy of Agricultural Sciences (CAAS);College of Veterinary, Yangohou University;College of Animal Science and Technology, Anhui Agricultural University;College of Animal Science and Technology, Shandong Agricultural University;

【通讯作者】 祁晶晶;于圣青;

【机构】 中国农业科学院上海兽医研究所扬州大学兽医学院安徽农业大学动物科技学院山东农业大学动物科技学院

【摘要】 【目的】研究滑液支原体(Mycoplasma synoviae, MS)脂蛋白P80的免疫反应性及其在MS血清抗体ELISA检测中的应用。【方法】对MSP80的氨基酸序列进行生物信息学分析、原核表达和纯化,并用免疫印迹法分析其与6种不同MS分离株阳性血清的免疫反应性以及与其他禽病原血清的交叉反应性;运用纯化的MS P80表达蛋白作为包被抗原建立了MS血清抗体的间接ELISA检测方法,对其敏感性和重复性进行检测;比较检测了与美国爱德士检测试剂盒对50份临床血清样品的阳性符合率。【结果】生物信息学分析预测MS P80蛋白为脂蛋白且含有信号肽,其在MS种内同源性高达98%-100%,与其他种属P80蛋白同源性在25%-34%之间,成功表达和纯化了MS P80重组蛋白(rMS P80);Western blotting分析表明纯化的rMS P80具有良好的免疫反应性和特异性;运用rMS P80建立的MS血清ELISA抗体检测方法可对不同株MS阳性血清进行抗体效价检测,而对其他禽病原阳性血清均无交叉反应性;该检测方法的批内变异系数小于5%,批间变异系数小于10%,重复性良好;与美国IDEXX检测试剂盒比较,本文建立的ELISA抗体检测方法敏感性更高,阳性符合率为75%,阴性符合率为89.47%,总样本符合率为86%。【结论】MS P80具有较好的免疫反应性、种内保守性和种间特异,并且可用作MS抗体检测的靶标抗原。

【基金】 国家重点研发项目(2017YFD0500705);中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金(2019JB11)~~
【所属期刊栏目】 研究报告 (2020年03期)
  • 【DOI】10.13343/j.cnki.wsxb.20190220
  • 【分类号】S852.62
  • 【下载频次】184
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