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长链非编码RNA MEG3对内质网应激诱导的结肠癌细胞凋亡及人结肠癌裸鼠移植瘤模型生长的影响

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【作者】 胥光热林静贾贵清邹丹

【Author】 XU Guang-re;LIN Jing;JIA Gui-qing;ZOU Dan;Sichuan Academy of Medical Sciences·Sichuan Provincial People’s Hospital Department of Gastroenterology;Sichuan Academy of Medical Sciences·Sichuan Provincial People’s Hospital Department of Cardiology;Sichuan Academy of Medical Sciences·Sichuan Provincial People’s Hospital Gastrointestinal Surgery;Children’s Health Care Center,Kaizhou District People’s Hospital;

【通讯作者】 胥光热;

【机构】 四川省医学科学院·四川省人民医院消化内科四川省医学科学院·四川省人民医院心内科四川省医学科学院·四川省人民医院胃肠外科重庆开州区人民医院儿童保健中心

【摘要】 目的探究人母系表达基因(MEG3)对内质网应激诱导的结肠癌细胞凋亡及人结肠癌裸鼠移植瘤模型生长的作用及其机制。方法通过RT-PCR筛选MEG3表达水平最低的结肠癌细胞系,构建了MEG3过表达及阴性对照细胞系并筛选了稳转株,RT-PCR检测各组细胞MEG3基因表达水平,CCK8检测细胞增殖,Hoechst染色检测细胞凋亡,Western blot检测Bcl-2、Bax、cleaved Caspase-9、p-PERK、ATF-4、p-EIF2α、CHOP、cleaved Caspase-12、p-AMPK、AMPK、p-mTOR、mTOR的蛋白表达。通过si-CHOP沉默结肠癌细胞中CHOP的表达,Hoechst染色检测细胞凋亡。构建人结肠癌裸鼠移植瘤模型并测量不同时期的肿瘤体积,IHC Ki67检测肿瘤生长,TUNNEL检测细胞凋亡,Western blot检测CHOP、cleaved Caspase-12、cleaved Caspase-3的蛋白表达。结果 SW480细胞系MEG3基因表达水平最低,被用于后续实验。在细胞实验中,与Control组比较,pc-MEG3组结肠癌细胞增殖、Bcl-2蛋白表达量、p-mTOR/mTOR比率降低,细胞凋亡率、Bax、cleaved Caspase-9、p-PERK、ATF-4、p-eIF2α、CHOP、cleaved Caspase-12蛋白表达量及p-AMPK/AMPK比率升高;沉默结肠癌细胞中CHOP表达可降低pc-MEG3引起的细胞凋亡率升高。在动物实验中,与Control组比较,pc-MEG3组肿瘤体积、Ki67细胞阳性率降低,细胞凋亡率、CHOP、cleaved Caspase-12、cleaved Caspase-3蛋白表达量升高。结论 MEG3可能通过内质网应激诱导结肠癌细胞凋亡,CHOP在其中起着关键作用;此外,AMPK/mTOR也参与了MEG3调控细胞凋亡的进程。

【关键词】 结肠癌细胞凋亡内质网应激MEG3
【基金】 四川省卫生和计划生育委员会科研项目(No.18PJ388)~~
【所属期刊栏目】 基础研究 (2020年01期)
  • 【分类号】R735.35
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