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菟丝子、莱菔子与其易混淆品的快速PCR法鉴别研究

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【作者】 蒋超崔占虎袁媛赵玉洋黄璐琦

【Author】 JIANG Chao;CUI Zhan-hu;YUAN Yuan;ZHAO Yu-yang;HUANG Lu-qi;State Key Laboratory of Dao-di Herbs Breeding Base,National Resource Center for Chinese Materia Medica,China Academy of Chinese Medical Sciences;Nanyang First People’s Hospital;

【机构】 中国中医科学院中药资源中心道地药材国家重点实验室培育基地南阳市第一人民医院

【摘要】 完善快速PCR鉴定检测体系,并建立菟丝子或莱菔子的分子鉴别方法。收集不同地区的菟丝子、莱菔子及其易混淆品材料,所有样品进行总DNA的提取,通过对菟丝子、莱菔子及其易混淆样品ITS片段进行扩增、测序,进行同源比对后根据其变异位点设计特异性鉴别引物,采用2步法进行PCR扩增,从而对菟丝子或莱菔子进行鉴别。通过对影响PCR退火温度、变性温度、退火时间、变性时间、循环次数等因素进行优化,并对不同型号PCR仪进行考察,分别获得菟丝子、莱菔子快速PCR反应程序。在稀释后的PCR产物中加入SYBR GreenⅠ染料,正品显示出明亮绿色荧光,而混淆品不显示荧光,且可有效的避免因引物二聚体而存在的假阳性问题。快速PCR方法可以简单快速鉴别菟丝子、莱菔子,为实现药材分子鉴别的现场运用提供技术支撑。

【关键词】 快速PCR菟丝子莱菔子分子鉴定荧光检测
【基金】 国家中医药管理局中医药行业科研专项(201407003)
【所属期刊栏目】 资源与鉴定 (2016年02期)
  • 【分类号】R282.5
  • 【被引频次】3
  • 【下载频次】325
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