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基于HTRF方法的PGE2释放抑制高通量筛选模型的建立及其在中药活性成分发现中的应用

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【作者】 白志茹费洪强李娜曹亮章晨峰王团结丁岗王振中萧伟

【Author】 BAI Zhi-ru;FEI Hong-qiang;LI Na;CAO Liang;ZHANG Chen-feng;WANG Tuan-jie;DING Gang;WANG Zhen-zhong;XIAO Wei;Jiangsu Kanion Pharmaceutical Co.,Ltd.;State Key Laboratory of New-tech for Traditional Chinese Medicine Pharmaceutical Process;

【机构】 江苏康缘药业股份有限公司中药制药过程新技术国家重点实验室

【摘要】 前列腺素E2(prostaglandins E2,PGE2)是参与炎症、疼痛等多种生理病理机制过程的活性物质。该文在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7产生PGE2的模型上,利用均相时间分辨荧光(homogeneous time-resolved fluorescence,HTRF)方法结合全自动化筛选操作系统,建立检测PGE2含量的高通量模型,选用公司中药物质基础库内的5 121个中药成分为检测样品,用于筛选PGE2抑制剂。该模型选择细胞铺板密度为每孔2 000个细胞;阳性化合物的IC50平均值为(7.3±0.1)μmol;检测板的Z’因子均大于0.5,平均值为0.7;5 121个样品中有228个样品在检测浓度对PEG2产生的抑制率大于50%,23个样品对PEG2产生的抑制作用大于80%。该模型数据稳定性和准确性均达到预期标准,表明筛选结果可靠真实;自动化筛选系统的引入,令该模型具有快速,微量,高效等优势,日平均筛选量达到14 000数据点以上,为抗炎镇痛相关新药发现和中药有效物质成分的前期快速筛选提供了新的模型。

【关键词】 前列腺素E2HTRF高通量中药物质基础库
【基金】 国家“重大新药创制”科技重大专项(2013ZX09402203);现代中药创新集群与数字制药技术平台项目
【所属期刊栏目】 药理 (2016年03期)
  • 【分类号】R285
  • 【下载频次】275
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