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灵芝DNA甲基转移酶(GlMET1)基因克隆及原核表达诱导分析

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【作者】 查良平王亚君刘爽赵玉洋袁媛黄璐琦

【Author】 ZHA Liang-ping;WANG Ya-jun;LIU Shuang;ZHAO Yu-yang;YUAN Yuan;HUANG Lu-qi;College of Pharmacy,Chengdu Universityof Traditional Chinese Medicine;State Key Laboratory Breeding Base of Dao-di Herbs,National Resource Center for Chinese Materia Medica,China Academy of Chinese Medical Sciences;National Center for Nanoscience and Technology;

【机构】 成都中医药大学药学院中国中医科学院中药资源中心道地药材国家重点实验室培育基地国家纳米科学中心

【摘要】 DNA甲基转移酶是DNA甲基化过程中最关键的酶,对生物体内的基因表达调节起着重要作用。研究根据灵芝转录组数据,通过全基因合成首次克隆得到灵芝DNA甲基转移酶Gl MET1,Genbank注册号为KU239998,并对其基因特性和空间结构进行全面的生物信息学分析。原核表达诱导分析表明p ET28a(+)-Gl MET1重组质粒在BL21(DE3)中能成功表达出目的蛋白,对其诱导条件进行优化,得出蛋白最合适的表达条件为:诱导温度为16℃,重组菌生长2.5 h(A600为0.8),IPTG浓度为0.2 mmol·L-1,诱导时间为12 h。实时荧光定量PCR结果表明不同品种灵芝Gl MET1的基因表达水平均有明显差异,且Gl MET1在成熟期的表达水平均低于幼年期,说明Gl MET1表达量随着灵芝的生长发育呈下降趋势。该研究结果为深入研究DNA甲基转移酶蛋白的作用机制奠定了基础。

【关键词】 灵芝甲基化甲基转移酶基因克隆原核表达
【基金】 国家杰出青年科学基金项目(81325023);国家高技术研究发展计划(863)项目(SS2014AA022201)
【所属期刊栏目】 资源与鉴定 (2016年06期)
  • 【分类号】S567.31
  • 【被引频次】4
  • 【下载频次】224
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