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丹酚酸B调控NIX介导的线粒体自噬保护H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤

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【作者】 辛高杰付建华韩笑李磊郭浩孟红旭赵雨薇贾飞凡刘建勋

【Author】 XIN Gao-jie;FU Jian-hua;HAN Xiao;LI Lei;GUO Hao;MENG Hong-xu;ZHAO Yu-wei;JIA Fei-fan;LIU Jian-xun;Institute of Basic Medicine, Xiyuan Hospital, Chinese Academy of Chinese Medical Sciences;School of Integrative Medicine, Binzhou Medical College;

【通讯作者】 付建华;

【机构】 中国中医科学院西苑医院基础医学研究所滨州医学院中西医结合学院

【摘要】 探讨丹酚酸B保护H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤的机制是否与调控NIX介导的线粒体自噬有关。体外培养H9c2心肌细胞,分为正常组、模型组、丹酚酸B组(50μmol·L-1),缺氧4 h复氧2 h建立缺氧/复氧损伤模型。正常组:高糖DMEM培养基培养;模型组:无糖无氧DMEM培养基培养,缺氧、复氧均不加任何药物;丹酚酸B组:缺氧同时加入用无糖DMEM培养基配制的丹酚酸B,其余过程同模型组。CCK-8法检测心肌细胞活力,微量酶标法检测心肌细胞乳酸脱氢酶(LDH)漏出量,化学荧光法检测细胞内活性氧(ROS)水平、线粒体膜电位(ΔΨm)变化,萤光素酶法检测细胞内三磷酸腺苷(ATP)水平,蛋白免疫印迹(Western blot)法检测自噬相关蛋白LC3-Ⅰ和LC3-Ⅱ、凋亡相关蛋白cleaved caspase-3及线粒体自噬受体蛋白NIX表达。与正常组相比,模型组H9c2心肌细胞活力、ATP水平降低(P<0.05),LDH漏出、ROS生成增多(P<0.01),ΔΨm降低(P<0.01),LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值、cleaved caspase-3、NIX蛋白表达均升高(P<0.05);与模型组相比,丹酚酸B可显著升高细胞活力、降低LDH漏出量和ROS水平(P<0.01),升高细胞内ATP含量(P<0.05)及ΔΨm(P<0.01),降低自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值(P<0.01),下调cleaved caspase-3和NIX蛋白表达(P<0.05)。丹酚酸B对H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用与抑制线粒体自噬发生有关,其具体机制可能为抑制NIX介导的线粒体自噬激活,从而升高ΔΨm,降低ROS生成,降低cleaved caspase-3和LC3-Ⅱ蛋白表达,升高细胞活力。

【关键词】 丹酚酸BH9c2心肌细胞线粒体自噬NIX自噬
【基金】 国家自然科学基金项目(81774145);国家自然科学基金青年基金项目(81503292);国家自然科学基金重点项目(81530099);国家重点基础研究发展计划项目(2015CB554406);国家“重大新药创制”科技重大专项(2017ZX09301018)
【所属期刊栏目】 药理 (2020年12期)
  • 【DOI】10.19540/j.cnki.cjcmm.20200224.402
  • 【分类号】R285.5
  • 【下载频次】506
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