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摘要:该研究制备了一种高灵敏度的黄曲霉毒素B1(aflatoxin B1,AFB1)单克隆抗体并基于该抗体建立间接竞争酶联免疫吸附法(indirect competition enzyme-linked immunosorbent assay,ic-ELISA),用于中药材中AFB1污染的高通量、快速筛查,以保障中药用药安全性。研究中以改进的肟化法修饰AFB1后,用EDC-NHS法偶联载体蛋白获得AFB1完全抗原,更加简便且减少环境污染。并利用加大免疫剂量、多种方式注射等对Balb/c雌鼠进行免疫,最终制备得AFB1单克隆抗体。通过对其免疫特性进行鉴定,结果显示该AFB1单克隆抗体属于IgG2b型免疫球蛋白,其灵敏度(IC50)可达0.15μg·L-1,亲和力为2.81×108 L·mol-1,与AFB2,AFG1和AFG2交叉反应率分别为35.07%,8.75%,1.15%,且与其他类真菌毒素几乎不存在交叉反应。基于该高灵敏度、高特异性抗体建立了ic-ELISA法,并用于中药材酸枣仁样品的检测。采用基质匹配的标准曲线进行计算,AFB1在0.05~0.58μg·L-1线性良好(R2=0.992),加样回收率为88.00%~119.0%,检测限为1.69μg·kg-1。采用所建立的方法测定了33批酸枣仁样品中AFB1的污染情况,其污染水平为3.62~206.58μg·kg-1,其检测结果与UHPLC-MS/MS测定结果的线性相关系数为0.996,并且无假阳性和假阴性情况,表明所建立的ic-ELISA准确、可靠,可为中药材酸枣仁中AFB1污染的快筛提供一种简便、有效的技术手段,同时可为其他中药中AFB1的检测与监控提供参考。
  • DOI:

    10.19540/j.cnki.cjcmm.20200522.201

  • 专辑:

    医药卫生科技

  • 专题:

    中药学

  • 分类号:

    R284

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