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反义RNA抑制Survivin在人骨肉瘤细胞系MG63中表达的实验研究

杨彤涛张勇李存孝黄立军范清宇马保安

第四军医大学第二附属医院全军骨科中心第四军医大学第二附属医院全军骨科中心 西安710038

摘要:[目的]研究人骨肉瘤细胞MG63中反义RNA对Survivin表达的抑制作用。[方法]培养骨肉瘤细胞MG63,采用RT-PCR的方法克隆人Survivin基因编码区cDNA。构建Survivin的反义诱导表达载体。转染MG63细胞,G418筛选稳定转染的细胞系。稳定转染的细胞系,以ZnSO4120μmol/L诱导,HE染色、Survivin免疫细胞化学染色透射电镜等形态学观察。绘制生长曲线。RT-PCR检测各组细胞Survivin的表达。Annexin V法检测细胞凋亡。[结果]RT-PCR从MG63细胞mRNA扩增了Survivin编码区cDNA,约420 bp。构建了pMDNA3-anti-Survivin重组质粒。转染MG63细胞,G418 1 000μg/m l筛选4周后,建成稳定转染细胞系。通过ZnSO4120μmol/L诱导,电子显微镜观察可见MG63/pMDNA3-anti-Survivin细胞出现凋亡。免疫细胞化学染色可见诱导后的MG63/pMDNA3-anti-Survivin Survivin蛋白表达明显降低。Annexin V染色后发现pMDNA3-anti-Survivin细胞,在ZnSO4诱导48 h后凋亡率达到11%,较对照组高出3倍。[结论]Survivin的反义RNA能够有效的抑制Survivin的表达,从而抑制肿瘤生长,并促进肿瘤细胞凋亡。
  • 专辑:

    医药卫生

  • 专题:

    外科学; 肿瘤学

  • 分类号:

    R738

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