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大鼠骨骺干细胞的分离鉴定及其永生化细胞株的构建

张树威陈安民郭风劲胡伟华李明辉廖晖祝文涛宋登新

华中科技大学同济医学院附属同济医院骨科华中科技大学同济医学院附属同济医院骨科 武汉430030

摘要:[目的]分离、鉴定大鼠骨骺干细胞并建立永生化的大鼠骨骺干细胞株,为细胞移植和转基因治疗提供稳定的细胞来源。[方法]采用Percoll不连续密度梯度离心法分离骨骺干细胞,利用电穿孔转染技术将含有猿肾病毒40大T抗原基因(SV40Tag)的质粒pCMVSV40T/PUR转染骨骺干细胞,经嘌呤霉素筛选,抗性克隆扩大培养。应用FGFR-3抗体和PCNA抗体进行免疫细胞化学染色,观察细胞的形态及其生长状况并绘制细胞生长曲线。用免疫细胞化学法和RT-PCR检测SV40Tag在转染细胞中的表达。[结果]转染后获得一个阳性细胞克隆,免疫细胞化学结果显示FGFR-3抗体染色阳性。SV40Tag抗体染色和RT-PCR结果显示SV40Tag已稳定转染入骨骺干细胞。转染细胞经扩大培养,命名为永生化骨骺干细胞。[结论]成功纯化大鼠骨骺干细胞并构建了SV40Tag永生化的骨骺干细胞株。
  • 专辑:

    医药卫生

  • 专题:

    基础医学

  • 分类号:

    R329

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