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转染早老素1突变基因SH-SY5Y细胞凋亡的研究

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【作者】 冯颖许贤豪彭丹涛张华乔立艳张星虎刘广志殷剑国红王红李宝林莫培生

【Author】 FENG Ying 1,XU Xian hao 1,PENG Dan tao 1,ZHANG Hua 1,QIAO Li yan 1,ZHANG Xing hu 1, LIU Guang zhi 1,YIN Jian 1,GUO Hong 1,WANG Hong 1,LI Bao lin 1,MO Pei sheng 2(1 Department of Neurology,Beijing Hospital,2 Clinic Laboratory Centr

【机构】 卫生部北京医院神经科

【摘要】 目的 探索转染早老素 -突变基因导致 SH-SY5 Y细胞凋亡的机制。方法 用 Xba I和 Acc6 5 I内切酶将携带野生型和突变型 PS-1的 p Bluescript质粒双酶切 ,电泳后纯化其 c DNA片段 ,然后将其克隆到 p CDNA3载体中。由脂质体介导将 p CDNA3空载体、携带有野生型和突变型 PS-1基因的 p CDNA3质粒分别转染到神经母细胞瘤细胞系 SH-SY5 Y细胞中。用蛋白印迹 ( Western blot)杂交检测其表达。用流式细胞仪 ( Coulter EpicsXL)检测在不同情况下不同细胞凋亡的百分率 ,荧光显微镜下观察碘化吡啶 ( PI)、Hoechst3334 2 ( Ho)双染的凋亡细胞的形态 ,并用分子生物学方法检测凋亡细胞的 DNA状况。结果 在无血清培养 2 4 h条件下含有空载体、野生型和突变型 ( A2 4 6 E) PS-1基因的 SY5 Y细胞凋亡百分率依次为 ( 6 .0 3± 2 .0 3)、( 8.34± 2 .4 1 )、( 2 6 .2±4 .6 )。用 SY5 Y细胞作为对照 ,其凋亡百分率为 ( 4 .2 2± 1 .89)。在 Aβ2 5 -35 ( 2 5 μmol/L)诱导下其凋亡百分率依次为 ( 2 4 .4± 3.6 )、( 2 7.7± 2 .5 )、( 5 0 .3± 8.3)。SY5 Y对照组为 ( 1 8.4± 3.1 )。比较显示含突变早老素 1基因细胞的凋亡程度明显升高 ( P<0 .0 0 1 )。结论 早老素 1基因突变导致神经细胞更容易在各种刺激下发生凋亡 ,

【关键词】 Alzheimer病早老素突变凋亡
【基金】 “九五”国家医学攻关课题基金资助项目 ( 96 -90 6 -0 5 -0 7)
  • 【分类号】R749.161
  • 【被引频次】1
  • 【下载频次】101
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