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大鼠κ-HA-pIRES2-EGFP的构建及表达

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【作者】 胡子有漆松涛张遐颜晓慧吴炳义

【Author】 HU Zi-you~1 QI Song-tao~2 ZHANG Xia~3 YAN Xiao-hui~1 WU Bing-yi~1(1. Research Center of Clinical Medicine, Nanfang Hospital, Southern Medical University,Guangzhou Guangdong 510515, China; 2. Department of Neurosurgery,Nanfang Hospital,Southern Medical University, Guangzhou Guangdong 510515, China;3. Institute of Mental Health Research, University of Ottawa, Ottawa, Canada)

【机构】 南方医科大学Institute of Mental Health Research,University of Ottawa

【摘要】 目的构建带HA标签的大鼠κ型阿片受体的pIRES2-EGFP表达质粒(κ-HA-pIRES2 EGFP),并实现其在HEK293细胞中的表达。方法提取大鼠脑组织总RNA,通过巢式RT-PCR扩增κ型阿片受体全长cDNA,将其克隆至pMD20-T载体中并进行测序鉴定,通过PCR引入HA标签,经酶切连接克隆入pIRES2-EGFP中,将获得的κ-HA-pIRES2-EGFP转染入HEK293细胞中,应用荧光显微镜观察EGFP表达情况,并采用细胞免疫荧光和蛋白印迹检测κ-HA表达。结果测序及酶切结果表明成功获得带HA标签的κ基因,并构建入pIRES2-EGFP表达质粒中,在荧光显微镜下可观察到转染细胞内有绿色荧光,应用免疫荧光和蛋白印迹法可观察到目的基因表达。结论利用巢式RT-PCR等技术成功构建了κ-HA-pIRES2-EGFP表达质粒,并在HEK293细胞中实现了高效表达。

【关键词】 κ型阿片受体巢式PCRpIRES2-EGFPHEK293
【基金】 国家自然科学基金海外青年学者合作研究基金资助项目(30628018)
【所属期刊栏目】 论著 (2009年05期)
  • 【分类号】R346
  • 【被引频次】2
  • 【下载频次】78
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