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中华眼镜蛇α-神经毒的纯化及其在烟碱型乙酰胆碱受体纯化上的应用

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【作者】 李佳徐江林烨沈佑晓刘毅张芳琳吴兴安徐志凯李柱一

【Author】 LI Jia,XU Jiang,LIN Ye,SHEN You-xiao,LIU Yi,ZHANG Fang-lin,WU Xing-an,XU Zhi-kai*,LI Zhu-yi△.*Department of Microbiology and Pathophysiology,the Forth Military Medical University,xi’an Shaanxi 710032,China;△Department of Neurology,Tangdu Hospital,the Forth Military Medical University,xi’an Shaanxi 710038

【机构】 第四军医大学唐都医院神经内科第四军医大学基础部病理学与病理生理学教研室第四军医大学基础部微生物学与病原生物学教研室

【摘要】 目的从中华眼镜蛇粗毒中分离纯化其α-神经毒组分,并将此α-神经毒作为亲和层析的配基纯化烟碱型乙酰胆碱受体(nAChR)。方法采用凝胶过滤层析、阳离子交换层析逐步分离纯化中华眼镜蛇粗毒,通过125I-α-银环蛇毒素(αBtx)-nAChR结合抑制实验检测蛋白活性,SDS-PAGE检测蛋白的相对分子质量和纯度;亲和层析纯化nAChR,放射免疫沉淀法测nAChR活性。结果从5g中华眼镜蛇粗毒中共纯化得到约20mg眼镜蛇α-神经毒,该眼镜蛇α-神经毒有一定的125I-αBtx-nAChR结合抑制活性,其半数抑制浓度(IC50)约为αBtx的28倍。以纯化的α-神经毒制备的亲和介质,可吸附大鼠骨骼肌肌膜提取物中约84%的125I-αBtx结合活性,且此活性可以被0.2mol/L卡巴胆碱洗脱。结论用简单的液相色谱方法可从中华眼镜蛇毒中分离纯化α-神经毒,并且可以以其为配体从大鼠骨骼肌中纯化nAChR。

【基金】 国家自然科学基金资助项目(30870841;30972721;31100620)
【所属期刊栏目】 论著 (2012年04期)
  • 【分类号】R284.1
  • 【被引频次】2
  • 【下载频次】85
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