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PK-15细胞微载体悬浮培养及PCV2增殖工艺研究

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【作者】 梁武乔健李亚杰易小萍杨保收

【Author】 LIANG Wu;QIAO Jian;LI Ya-jie;YI Xiao-ping;YANG Bao-shou;College of Veterinary Medicine, China Agricultural University;Ringpu Biological Research Institute,Tianjin Ringpu Biotechnology Co, Ltd;State Key Laboratory of Bioreactor Engineering ECUST;

【通讯作者】 乔健;易小萍;

【机构】 中国农业大学动物医学院天津瑞普生物技术股份有限公司华东理工大学生物反应器国家重点实验室

【摘要】 研究表明,PCV2仅在PK15等少数哺乳动物细胞上增殖,但由于PCV2毒力弱,且不产生细胞病变,获得高滴度病毒难度较大[1]。因此,PCV2的培养滴度高低已成为制约现有疫苗质量的关键瓶颈之一。为建立在生物反应器内微载体逐级放大培养PK-15细胞和增殖PCV2技术,本研究以德国Sartorius14 L生物反应器微载体悬浮培养PK-15细胞,对PK-15细胞初始接种密度、搅拌转速、微载体浓度、PCV2接毒时间、接毒剂量、收毒时间等工艺参数进行了摸索和优化[2-3]。结果表明:3 g/L的微载体和60 r/min的搅拌转速下,采用0.5×106cells/mL的初始接种密度操作工艺可获得最佳PK-15细胞生长效能。细胞生长后6 h接毒,采用感染复数(MOI)为0.5的接毒比例,细胞接毒后在微载体上生长96 h可获得最高的PCV2增殖滴度108.5TCID50/mL,利用该工艺,经过消化转移将PK-15细胞从14 L反应器放大至42 L反应器,微载体上细胞贴附均匀、生长旺盛,42 L反应器中培养72 h细胞密度可达39.0×105 cells/mL,病毒滴度108.3TCID50/mL,应用生物反应器培养PCV2滴度较常规转瓶培养工艺提高了近10倍。进一步表明PCV2悬浮培养放大与接毒工艺稳定,为下一步实现工业级规模化生产奠定基础。

【所属期刊栏目】 兽医药械 (2019年04期)
  • 【分类号】S859.797
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