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高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒微滴式数字PCR检测方法的建立及初步应用

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【作者】 王林孙丹韦海涛宋彦军周德刚高晓龙梅力冯小宇

【Author】 WANG Lin;SUN Dan;WEI Hai-tao;SONG Yan-jun;ZHOU De-gang;GAO Xiao-long;MEI Li;FENG Xiao-yu;Beijing Animal Disease Control Center;Beijing Institute of Veterinary Drugs Control;

【通讯作者】 冯小宇;

【机构】 北京市动物疫病预防控制中心北京市兽医药品监察所

【摘要】 根据高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒的非结构蛋白(NSP2)基因序列,利用Primer Premier 5.0软件设计合成NSP2特异性的引物和TaqMan探针,建立了高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒的微滴式数字PCR(Droplet digital PCR, ddPCR)检测方法。结果显示,ddPCR最佳反应的引物和探针浓度分别为900 nM和250 nM;特异性和重复性检测结果表明,ddPCR具有良好的特异性和较高的重复性;灵敏度检测结果表明,ddPCR的检测灵敏度比荧光定量PCR高10倍;ddPCR的检测结果与标准品拷贝数的相关系数为R~2=0.999 1,表明该方法检测结果具有良好的线性关系和可信度;用建立好的ddPCR方法对10份临床样品的高致病性PRRSV进行了拷贝数定量。

【基金】 北京市农业局农业科技项目(20160127);北京市科技重大专项课题(Z171100001317013)
【所属期刊栏目】 实验观察 (2019年12期)
  • 【分类号】S852.651
  • 【下载频次】9
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