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梅花鹿骨钙素的原核表达与活性研究

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【作者】 张楠楠李宏灵李帅军张鹏飞赵雨曲毅

【Author】 ZHANG Nannan;LI Hongling;LI Shuaijun;ZHANG Pengfei;ZHAO Yu;QU Yi;Development Center of Traditional Chinese Medicine and Bioengineering, Changchun University of Chinese Medicine;Jilin Food and Drug Safety Monitoring Center;

【机构】 长春中医药大学中医药与生物工程研究开发中心吉林省食品药品安全监测中心

【摘要】 目的利用基因工程技术表达纯化梅花鹿骨钙素重组蛋白(Bone gla protein,BGP)并初步研究其活性,为研究梅花鹿茸生长发育提供技术支撑。方法通过PCR技术获取BGP基因,构建p GEX-BGP-His表达载体,并转化至Rosseta(DE3)宿主菌中,IPTG诱导表达。经Ni Sephrose 6 Fast Flow分离纯化,SDS-PAGE鉴定纯化产物。MTT法分析BGP对鹿茸软骨细胞chon-sv40的生物活性。结果经双酶切、测序证实p GEX-BGP-His表达载体构建成功;成功诱导表达相对分子量33.5 KDa的重组蛋白;以37℃,0.1 mmol/L IPTG诱导5 h条件下重组蛋白表达量较高;蛋白纯化后纯度可达95%;重组蛋白对鹿茸软骨细胞chon-sv40具有明显促增殖作用。结论骨钙素与鹿茸软骨细胞chon-sv40的增殖密切相关,为后续BGP在骨代谢机制以及鹿茸有效成分的研究奠定基础,对鹿茸生长机制的研究具有重要意义。

【关键词】 梅花鹿骨钙素原核表达鹿茸软骨细胞
【基金】 吉林省科技发展项目(20140622003JC);吉林省科技发展计划项目(20130101142JC)
【所属期刊栏目】 论著_实验研究 (2017年01期)
  • 【DOI】10.13463/j.cnki.jlzyy.2017.01.025
  • 【分类号】S825
  • 【被引频次】1
  • 【下载频次】58
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