记笔记

Gefitinib抑制人胶质瘤U251细胞生长分子机制研究

摘要：目的:研究Gefitinib对人胶质瘤U251细胞的生长抑制作用及相关机制。方法:用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测不同浓度Gefitinib对U251细胞增殖活性的效应。流式细胞术（FCM）分析Gefitinib对U251细胞周期以及凋亡的影响,蛋白质印迹法检测周期、凋亡相关蛋白表达量的变化。罗丹明123/PI双染流式细胞术与吖啶橙（AO）染色荧光显微镜分析凋亡。结果:Gefitinib能显著抑制U251细胞的增殖,并呈剂量依赖关系,半数抑制浓度（IC50）为18.01μmol/L。通过流式、荧光染色以及蛋白质印迹检测分析发现,随着浓度的增加,Gefitinib能明显阻滞U251细胞于G0/G1期,主要通过降低线粒体膜电位诱导细胞凋亡,0、10、20和40μmol/L浓度处理后细胞凋亡率分别为1.28%、4.48%、77.97%和90.59%。Gefitinib对U251细胞的周期阻止与诱导凋亡主要是下调细胞周期依赖蛋白激酶CDK2、CDK4和CDK6的表达,同时上调p27Kip1的表达,引起细胞周期阻滞。上调、活化凋亡相关蛋白Bax,下调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,导致线粒体膜电位降低,活化Caspase-9,诱导细胞凋亡。结论:Gefitinib在15～60μmol/L浓度范围内,能明显抑制U251细胞的增殖并能通过周期阻滞诱导其凋亡,其作用呈浓度依赖关系。主要通过下调周期依赖蛋白激酶的表达阻滞U251细胞于G0/G1期,降低线粒体膜电位,活化Caspase途径诱导U251细胞凋亡。

关键词：

神经胶质瘤; 流式细胞术; 肿瘤细胞,培养的; 细胞凋亡;