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TAIL-PCR方法快速克隆银杏查尔酮合成酶基因及序列分析(英文)

许锋程水源王燕李琳玲程述汉

长江大学园艺园林学院山东农业大学园艺科学与工程学院 湖北荆州434025山东农业大学园艺科学与工程学院山东泰安271018湖北荆州434025黄冈师范学院生命科学与工程学院湖北黄冈438000

摘要:热不对称交错PCR(TAIL-PCR)方法已广泛应用于从多种生物克隆已知DNA序列的侧翼序列。对传统的TAIL-PCR方法进行改良:(1)将TAIL技术应用于TAIL-PCR中第3步PCR循环。(2)以10bp的随机简并引物即RAPD引物代替基因侧翼简并引物。以银杏品种家佛手的叶基因组DNA为模板,利用简并引物克隆到银杏查尔酮合成酶基因(CHS)片段序列Gbchs1,以此序列设计3条特异引物,利用改良的热不对称交错PCR方法克隆到CHS基因Gbchs2。结果表明,Gbchs2长1238bp,编码304个氨基酸并包含3’末端序列。GbCHS2蛋白质序列与其他植物的CHS蛋白质序列高度同源,包含CHS蛋白质保守的环化作用活性位点,催化活性位点、香豆素活性位点、及催化活性基序。改良后的TAIL-PCR方法为基因全长的克隆提供了一种简单快速高效的新方法。
  • 专辑:

    农业

  • 专题:

    园艺

  • 分类号:

    S664.3

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