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野生型抑癌基因PTEN真核表达载体的鉴定及其在COS-7细胞株表达产物的鉴定

马斌林徐虓库热西·玉努斯耿中利

新疆医科大学附属肿瘤医院乳腺头颈外科新疆医科大学分子生物学教研室新疆医科大学附属肿瘤医院乳腺头颈外科 新疆乌鲁木齐830011

摘要:目的:电泳并真核细胞鉴定pcDNA3.0-PTEN真核表达质粒。方法:将含有pcDNA3.0-PTEN真核表达质粒的EcoliJM109细胞挑少许于LB液体培养基上,振荡过夜,离心,碱裂解法裂解细菌,参照UNIQ-10柱式质粒抽提试剂盒操作步骤抽提质粒,电泳鉴定,将获得的pcDNA3.0-PTEN真核表达质粒采用脂质体转染法转入COS-7细胞株,传代培养细胞株,West-Blot鉴定PTEN蛋白质的表达。结果:实验得到的pcDNA3.0-PTEN真核表达质粒大小约为6.0kb,质粒浓度为0.080μg/μl。该质粒目的基因在COS-7细胞株表达产物经West-Blot鉴定证实为目的基因表达产物。结论:pcDNA3.0-PTEN真核表达质粒内含有所需目的基因,该真核表达系统能在真核细胞株COS-7表达所需目的基因产物,可以应用该质粒对PTEN基因缺失或杂合性缺失的肿瘤细胞进行试验性治疗。
  • 专辑:

    医药卫生

  • 专题:

    肿瘤学

  • 分类号:

    R73-3

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