人血管抑制因子Vasostatin(120～180aa)的真核表达、纯化及活性鉴定

【作者】 刘建巨； 王建文； 宋娅莉；

【Author】 LIU Jian-ju WANG Jian-wen SONG Ya-li (Department of Ophthalmology,First Hospital Attached to Harbin Medical University,Harbin 150001,China)

【机构】 哈尔滨医科大学附属第一医院眼科医院； 北京华大基因研究中心GPA 组 哈尔滨150001； 哈尔滨150001； 北京 100001；

【摘要】 目的利用毕赤酵母表达系统表达人血管抑制因子Vasostatin(120～180aa),经纯化后,观察其抑制血管内皮细胞增殖的活性。方法采用PCR技术扩增出人血管抑制因子Vasostatin(120～180aa)的全长cDNA序列,将其克隆至真核表达载体pPIC9K中,转化毕赤酵母KM71,以甲醇诱导表达,并进行Western blot检测及金属螯合层析纯化。采用MTT法检测纯化的血管抑制因子对血管内皮细胞增殖的抑制作用。结果重组表达质粒pPIC9K-Vasostatin(120～180aa)经菌落PCR、酶切和测序鉴定,证明构建正确。经Western blot检测可见一条特异条带,纯化后的蛋白纯度达88.76%,浓度为300μg/ml,在体外可抑制人脐静脉血管内皮细胞ECV304的增殖。结论人血管抑制因子Vasostatin(120～180aa)可在毕赤酵母中以分泌形式表达,并具有抑制血管内皮细胞增殖的活性。更多还原