人血管抑制因子Vasostatin（120～180aa）的真核表达、纯化及活性鉴定

刘建巨王建文宋娅莉

哈尔滨医科大学附属第一医院眼科医院北京华大基因研究中心GPA 组哈尔滨150001北京 100001

摘要：目的利用毕赤酵母表达系统表达人血管抑制因子Vasostatin（120～180aa）,经纯化后,观察其抑制血管内皮细胞增殖的活性。方法采用PCR技术扩增出人血管抑制因子Vasostatin（120～180aa）的全长cDNA序列,将其克隆至真核表达载体pPIC9K中,转化毕赤酵母KM71,以甲醇诱导表达,并进行Western blot检测及金属螯合层析纯化。采用MTT法检测纯化的血管抑制因子对血管内皮细胞增殖的抑制作用。结果重组表达质粒pPIC9K-Vasostatin（120～180aa）经菌落PCR、酶切和测序鉴定,证明构建正确。经Western blot检测可见一条特异条带,纯化后的蛋白纯度达88.76%,浓度为300μg/ml,在体外可抑制人脐静脉血管内皮细胞ECV304的增殖。结论人血管抑制因子Vasostatin（120～180aa）可在毕赤酵母中以分泌形式表达,并具有抑制血管内皮细胞增殖的活性。

关键词：

血管抑制因子; 真核表达; 金属螯合层析; 血管内皮细胞; 活性;

基金资助：

黑龙江省教育厅科学技术研究项目（11521164）；