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青蒿素对过氧化氢诱导的人视网膜色素上皮(RPE)细胞氧化应激损伤的抑制作用

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【作者】 黄晓旭苏荣健刘华

【Author】 HUANG Xiao-Xu;SU Rong-Jian;LIU Hua;the Third Affiliated Hospital of Jinzhou Medical University,School of Basic Medicine of Jinzhou Medical University;the School of Basic Medicine of Jinzhou Medical University;the Third Affiliated Hospital of Jinzhou Medical University;

【通讯作者】 刘华;

【机构】 锦州医科大学附属第三医院锦州医科大学基础医学院锦州医科大学基础医学院锦州医科大学附属第三医院

【摘要】 目的探讨青蒿素对过氧化氢诱导的人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞氧化应激损伤的抑制作用。方法将ARPE-19细胞接种于96孔板,每孔7×103个细胞,细胞贴壁后分别加入不同浓度青蒿素,筛选对细胞增殖有效的最佳药物浓度。将APRE-19细胞分成4组。对照组:不做特殊处理;过氧化氢组:加入100μmol·L-1过氧化氢作用细胞24 h;青蒿素组:加入青蒿素30μmol·L-1,作用细胞24 h;青蒿素预保护组:加入30μmol·L-1青蒿素预保护细胞24 h后加入100μmol·L-1过氧化氢作用24 h。利用MTT法筛选青蒿素对ARPE-19细胞作用的最佳药物浓度;通过Hoechst33342染色及线粒体膜电位观测细胞凋亡情况;检测细胞内超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)含量和活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS)阳性细胞数; Western blot法检测相关蛋白表达水平。结果 MTT法检测发现,30μmol·L-1的青蒿素对细胞增殖作用最强(均为P <0. 01)。青蒿素预保护组与过氧化氢组相比,细胞增殖率升高,凋亡细胞数显著减少,差异均有统计学意义(均为P <0. 05)。线粒体膜电位染色显示,青蒿素预保护组与过氧化氢组相比绿色染色减少,红色染色增多,说明青蒿素预保护组凋亡细胞数减少。与对照组相比,青蒿素组ARPE-19细胞中SOD含量显著增加(P <0. 05);与过氧化氢组相比,青蒿素预保护组细胞内SOD含量明显增高(P <0. 05),说明青蒿素能增加细胞内抗氧化物质,减少细胞凋亡。与对照组相比,青蒿素组ROS阳性细胞减少(P <0. 05);与过氧化氢组相比,青蒿素预保护组ROS阳性细胞亦明显减少(P <0. 05),说明青蒿素可减少过氧化氢诱导的活性氧物质积聚。通过Western blot检测发现,青蒿素能促进ARPE-19细胞内AKT的磷酸化,过氧化氢组ARPE-19细胞内Caspase-3、PARP、Keap1相对表达升高,Bcl-2、Nrf2、HO-1降低;青蒿素预保护组ARPE-19细胞内Caspase-3、PARP、Keap1相对表达降低,Bcl-2、Nrf2、HO-1升高,差异均有统计学意义(均为P <0. 05)。结论青蒿素通过调节Nrf2/keap1信号通路来减小过氧化氢诱导的ARPE-19细胞的氧化应激损伤。

【基金】 国家自然科学基金资助(编号:31571184);辽宁省科技厅-锦州医科大学联合基金项目(编号:20170540382)~~
【所属期刊栏目】 实验研究 (2019年04期)
  • 【DOI】10.13389/j.cnki.rao.2019.0069
  • 【分类号】R77
  • 【下载频次】228
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