miR-186靶向调控骨桥蛋白基因表达对骨髓间充质干细胞成骨分化的影响

姚克陈涛王冬高俊明

辽宁省盘锦市中心医院骨科辽河油田总医院渤海院区骨科辽河石油勘探局康复医院骨科

摘要：目的:探讨miR-186对骨髓间充质干细胞（b MSCs）成骨向诱导分化过程中骨桥蛋白（OPN）基因的靶向作用及其对b MSCs成骨分化的影响。方法:分离培养b MSCs,应用骨形成蛋白2成骨向诱导分化并采用碱性磷酸酶染色和Von-kossa染色鉴定;运用生物信息学方法对miR-186和OPN基因的靶向配对关系进行预测,采用荧光素酶报告系统鉴定;脂质体2000转染miR-186模拟物以及干扰OPN基因的siRNA后,Real-time PCR检测miR-186和OPN mRNA的表达,Western blot检测OPN蛋白的表达。结果:光镜下可见b MSCs均匀分布,诱导分化后的细胞碱性磷酸酶染色呈蓝色。生物信息学软件Target Scan和miRanda显示miR-186和OPN基因二者靶向配对良好,荧光素酶报告系统进一步验证发现,miR-186能够抑制OPN mRNA表达。Real-time PCR和Western blot检测结果表明过表达miR-186能够降低OPN mRNA和蛋白的表达。结论:miR-186通过下调b MSCs成骨向诱导分化过程中OPN基因表达进而抑制b MSCs的成骨分化。

关键词：

骨髓间充质干细胞; 微小RNA; 骨桥蛋白; 小鼠;