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Kap147/Kpn杂合启动子引导Cre重组酶在转基因小鼠睾丸组织中特异性表达

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【作者】 刘飞孟军范立强

【Author】 LIU Fei;MENG Jun;FAN Liqiang;State Key Laboratory of Bioreactor Engineering, East China University of Science and Technology;

【通讯作者】 范立强;

【机构】 华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室

【摘要】 为了验证杂合启动子Kap147/Kpn的体内、外功能,构建了Kap147/Kpn引导的Cre重组酶转基因鼠。体外细胞转染和激素诱导证实Kap147/Kpn启动子具有细胞特异性,且受雄激素诱导。通过RT-PCR(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction)和荧光定量PCR(Polymerase Chain Reaction)证实Kap147/Kpn启动子引导Cre重组酶在转基因鼠(Cre-F0-2)睾丸组织中特异表达。荧光定量PCR检测发现,Cre mRNA在转基因鼠睾丸中的表达量与小鼠年龄相关,经15 mg/(kg·d)二氢睾酮(DHT)处理后睾丸中Cre mRNA表达量增加1.7倍,经100 mg/(kg·d)醋酸环丙孕酮(CAP)处理后Cre mRNA表达量降低约50%,证实Kap147/Kpn启动子在转基因鼠体内受雄激素调控。荧光组化显示,转基因鼠Cre-F0-2与双荧光Cre重组酶报告鼠杂交后,能成功介导子代鼠睾丸组织特异性的基因敲除。杂合启动子Kap147/Kpn引导的Cre重组酶转基因鼠(Cre-F0-2)具有雄激素调节性和睾丸靶向性,是一个潜在的研究睾丸基因功能的有力工具。

【基金】 国家自然科学基金(81071252)
【所属期刊栏目】 研究论文_生物工程 (2019年06期)
  • 【DOI】10.14135/j.cnki.1006-3080.20180830001
  • 【分类号】Q78
  • 【下载频次】64
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