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卵形鲳鲹Hepcidin-5的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备

何明旺项雅婧孙云曹贞洁周永灿

  海南省热带水生生物技术重点实验室    南海海洋资源利用国家重点实验室    热带生物资源教育部重点实验室海南大学海洋学院  

摘要:为了制备高效的卵形鲳鲹hepcidin-5蛋白多克隆抗体和对其特异性进行鉴定,本研究通过PCR扩增的方法获得了卵形鲳鲹抗菌肽hepcidin-5(Tro H5)的成熟肽cDNA序列,并构建了原核表达载体pET-32a(+)/TroH5,然后将其转入大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)中进行原核表达.经IPTG诱导,成功表达了相对分子质量约为35kDa的融合重组蛋白.经不同诱导条件的优化,最终确定在IPTG终浓度为0. 1mmol/L和温度为20℃时,其表达量最大.可溶性分析表明:该融合蛋白主要存在于上清中.经镍柱亲和层析纯化获得了纯度较高的融合蛋白,然后以免疫小鼠制备多克隆抗体,经ELISA法检测,其效价达到1∶105.蛋白免疫印迹(Western blot)检测表明:所制备的多克隆抗体特异性强.本研究为进一步探究hepcidin-5的生物学功能奠定了基础.
  • DOI:

    10.15886/j.cnki.hdxbzkb.2019.0006

  • 专辑:

  • 专题:

  • 分类号:

    S948

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